Determination of Proteolytic Activity of Rumen Liquor with Azocasein

Summary The azocasein method used to determine proteolytic activity was adapted to assay this activity in rumen liquor, with precautions designed to eliminate interference by pigments and precipitable substances present in rumen liquor. The optimal conditions of measurement are: incubation of rumen liquor with azocasein in pH 6.5 phosphate buffer at 40 °C for 1 hour, precipitation with trichloroacetic acid, and photometry of the coloured supernate in an alkaline medium at 480 nm. The proteases of rumen liquor are partly soluble and partly particle‐bound and do not require a reducing environment for their activity. The activity has a flat pH‐optimum around 6.5. Heat inactivation starts at around 50 °C. Zusammenfassung Bestimmung der proteolytischen Aktivität im Pansensaft mittels Azocasein Die Azocaseinmethode zur Bestimmung der proteolytischen Aktivität wurde modifiziert zur Untersuchung von Pansensaft, unter spezieller Berücksichtigung der Ausschaltung von Interferenzen durch Pigmente und präzipitierbare Substanzen im Pansensaft. Optimale Meßbedingungen: Inkubation des Pansensaftes mit Azocasein in einer Phosphat‐Pufferlösung mit pH 6,5, bei 40 °C, während einer Stunde; Präzipitation mit Trichloressigsäure und photometrische Bestimmung der Absorption des Überstandes bei 480 nm in einem alkalischen Medium. Die Proteasen des Pansensaftes sind teilweise gelöst und teilweise gebunden an Partikel. Sie benötigen für ihre Aktivität kein reduzierendes Milieu. Das flache Aktivitätsoptimum liegt bei pH 6,5. Bei einer Temperatur von etwa 50 °C beginnt die Hitzeinaktivierung. Résumé Détermination de l'activité protéolytique dans le jus de la panse au moyen de l'azocaséine La méthode à l'azocaséine pour la détermination de l'activité protéolytique a été modifiée pour l'examen du jus de la panse en tenant compte spécialement du déclenchement des interférences dues aux pigments et aux substances précipitables dans le jus de la panse. Conditions de mesure optimales: incubation du jus de la panse avec l'azocaséine dans une solution tampon de phosphate avec pH de 6,5, à 40 °C pendant une heure; précipitation avec de l'acide trichloracétique et mesure photométrique de l'absorption du surnageant sur 480 nm dans un milieu alcalin. Les protéases du jus de la panse sont en partie solubilisées et en partie liées aux particules. Elles n'ont besoin d'aucun milieu réducteur pour leur activité. L'optimum d'activité plat se situe à un pH de 6,5. L'inactivation par la chaleur commence à une température d'environ 50 °C. Resumen Determinación de la actividad proteolítica del líquido ruminal de ovejas con azocaseína El método a base de azocaseina para determinar la actividad proteolítica se modificó para el examen del jugo de la panza bajo la consideración especial de suprimir las interferencias por los pigmentos y substancias precipitantes del líquido ruminal. Las condiciones óptimas de medición son: incubación del líquido de la panza con azocaseína en una solución tampón defosfato con un pH 6,5, a 40 °C, durante una hora; precipitación con ácido tricloroacético y determinación fotométrica de la absorción del sobrenadante a 480 nm. en un medio alcalino. Las proteasas del jugo de la panza se hallan solubilizadas en parte, y en parte ligadas a partículas. Para su actividad no precisan de ningún medio reductor. El óptimo de actividad llano se localiza a un pH de 6,5. A la temperatura de unos 50 °C comienza la inactivación térmica.