In situ Hybridization to Study the Pathogenicity of North American Avian Metapneumovirus Subtypes A and B in Turkeys

La hibridación in situ para estudiar la patogenicidad de los subtipos A y B del metapneumovirus aviar norteamericano en pavos. El metapneumovirus aviar (aMPV) es un patógeno altamente contagioso del tracto respiratorio superior que causa importantes pérdidas económicas tanto en pollos como en pavos. A nivel mundial, existen cuatro subgrupos antigénicamente distintos: A, B, C y D, basados en la secuencia de la glicoproteína G. Los subgrupos A y B surgieron recientemente en Estados Unidos, causando varios brotes en pollos y pavos, con altas tasas de morbilidad y mortalidad, así como una disminución en la producción de huevo. El metapneumovirus aviar infecta principalmente el tracto respiratorio superior, los párpados y conjuntiva. La hibridación in situ (ISH) es una herramienta molecular que localiza secuencias específicas de ácidos nucleicos dentro de células o tejidos. Se diseñaron sondas para hibridación in situ para detectar el gene N, altamente conservado, de los subtipos A y B del metapneumovirus aviar, localizando el ácido nucleico del virus a nivel celular en el tracto respiratorio, lo que permite visualizar los sitios de unión y replicación viral. Se sometieron a hibridación in situ diferentes tejidos de pavos positivos por rRT-PCR. Los pavos afectados mostraron un aumento de la morbilidad y la mortalidad, que coincidió con signos clínicos y lesiones de sinusitis catarral, rinitis y conjuntivitis. Los senos infraorbitarios, los cornetes nasales y la conjuntiva fueron los tejidos más afectados. Además de la detección del metapneumovirus aviar, se detectaron infecciones bacterianas secundarias. Las sondas diseñadas identificaron la diseminación del metapneumovirus a lo largo de la mucosa respiratoria superior, incluyendo los senos nasales/infraorbitarios, la tráquea y los bronquios secundarios. También mostraron la presencia del virus en las secreciones luminales del tracto respiratorio superior. Este trabajo describe la distribución y la excreción viral en los órganos respiratorios de pavos de engorde comerciales infectados naturalmente con metapneumovirus aviar en condiciones de campo. Estos resultados contribuyen a la comprensión de la patogénesis del metapneumovirus aviar y confirman la mejor estrategia de muestreo para el diagnóstico.